视网膜组织对小鼠的烟草烟雾和电子烟蒸气产生炎症反应-又见外烟

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视网膜组织对小鼠的烟草烟雾和电子烟蒸气产生炎症反应

2021-07-15 23:13:33 admin

香烟烟雾已被确定为发生年龄相关性黄斑变性 (AMD) 的主要风险因素。作为传统香烟(C-香烟)的替代品,电子烟(E-香烟)已在全球范围内推广,目前被广泛使用。电子烟使用量的增加引起了人们对与视网膜组织相关的短期(2 周)、中期(3 个月)和长期(8 个月)后果的担忧。在本报告中,在小鼠模型中进行了一项对照研究,通过 (1) 比较 C 香烟烟雾和电子烟的影响来探索电子烟蒸气对视网膜、视网膜色素上皮 (RPE) 和脉络膜组织的综合影响。分别对视网膜上的香烟蒸气和(2)确定电子烟蒸气对 RPE 的影响并分析炎症(IL-1β,ELISA 测定视网膜/RPE/脉络膜中的 TNFα、iNOS)和血管生成(VEGF、PEDF)介质。数据显示,C 型香烟烟雾暴露促进了体内视网膜的炎症反应。与视网膜组织相比,暴露于电子烟(不含尼古丁)蒸气的小鼠在 RPE 和脉络膜中发生了更明显的炎症和血管生成反应,而含尼古丁的电子烟蒸气引起的反应更为严重。炎症和促血管生成反应都随着暴露时间的延长而增加。这些结果表明,接触 C 型香烟烟雾对视网膜有害。同样,接触电子烟蒸气(有或没有尼古丁)会增加视网膜炎症和血管生成刺激的发生和进展,这也可能与人类湿性 AMD 的发病有关。iNOS) 和血管生成 (VEGF、PEDF) 介质在视网膜/RPE/脉络膜中通过 ELISA 测定。数据显示,C 型香烟烟雾暴露促进了体内视网膜的炎症反应。与视网膜组织相比,暴露于电子烟(不含尼古丁)蒸气的小鼠在 RPE 和脉络膜中发生了更明显的炎症和血管生成反应,而含尼古丁的电子烟蒸气引起的反应更为严重。炎症和促血管生成反应都随着暴露时间的延长而增加。这些结果表明,暴露于 C 型香烟烟雾对视网膜有害。同样,接触电子烟蒸气(有或没有尼古丁)会增加视网膜炎症和血管生成刺激的发生和进展,这也可能与人类湿性 AMD 的发病有关。iNOS) 和血管生成 (VEGF、PEDF) 介质在视网膜/RPE/脉络膜中通过 ELISA 测定。数据显示,C 型香烟烟雾暴露促进了体内视网膜的炎症反应。与视网膜组织相比,暴露于电子烟(不含尼古丁)蒸气的小鼠在 RPE 和脉络膜中发生了更明显的炎症和血管生成反应,而含尼古丁的电子烟蒸气引起的反应更为严重。炎症和促血管生成反应都随着暴露时间的延长而增加。这些结果表明,暴露于 C 型香烟烟雾对视网膜有害。同样,接触电子烟蒸气(有或没有尼古丁)会增加视网膜炎症和血管生成刺激的发生和进展,这也可能与人类湿性 AMD 的发病有关。

关键信息

  • C-香烟烟雾暴露促进体内视网膜的炎症反应。

  • 与视网膜组织相比,暴露于电子烟(不含尼古丁)蒸气的小鼠会在 RPE 和脉络膜中产生更明显的炎症和血管生成反应,而含尼古丁的电子烟蒸气会引起更严重的反应。

  • 随着电子烟蒸气暴露时间的延长,炎症和促血管生成反应都会增加。

介绍

年龄相关性黄斑变性 (AMD) 是全球人口中严重视力障碍的主要原因之一 [ 1 ]。根据病理特征,AMD根据脉络膜新生血管(CNV)的有无,分为干性和湿性[ 2 ]。炎症和免疫失调在 AMD 的发病机制中起着至关重要的作用。

先前的研究表明,促炎细胞因子白细胞介素 1β (IL-1β) 和肿瘤坏死因子 α (TNF-α) 可以促进脉络膜新生血管膜中的血管生成 [ 3 , 4 ],并且能够破坏血管的结构和功能。外部和内部血-视网膜屏障 (BRB) [ 5 , 6 , 7],导致湿性AMD的进展。此外,炎症酶诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 可持久产生大量一氧化氮 (NO),在病理状况如炎症或存在某些细胞因子 (如 TNF、白细胞介素) 时上调。过量的 NO 不仅会导致氧化应激,还会与超氧阴离子自由基反应形成过氧亚硝酸盐,进一步导致血管损伤并促进 AMD 或其他视网膜病变的发展 [ 8 ]。

促血管生成细胞因子血管内皮生长因子 (VEGF) 参与血管生成和血管通透性的复杂调节,是 CNV 的关键启动子。然而,受损的 VEGF 信号会导致功能障碍的视网膜色素上皮 (RPE)/布鲁赫膜 (BrMb),这可能与干性 AMD 的发病机制有关 [ 9 ]。相比之下,色素上皮衍生因子 (PEDF) 是一种抗血管生成和神经保护因子。它影响脉络膜内皮细胞的增殖和氧化应激状态[ 10 ]。已经在 RPE 和脉络膜中证明了 VEGF 和 PEDF 之间的平衡,这种平衡的破坏将导致病理性血管生成 [ 11 , 12 ]。

在 AMD 的众多危险因素中,香烟烟雾是最大的单一可预防因素 [ 13 ]。流行病学证据高度支持香烟烟雾与 AMD 进展之间的因果关系 [ 14 ]。电子烟是由电池供电的设备,通过加热通常含有溶剂、调味剂(含或不含尼古丁)的电子液体,向用户输送蒸汽 [ 15 ]。正如宣传的“危险性较低”的替代品一样,电子烟应该产生较少的毒物。然而,迄今为止尚未分析电子烟蒸气对视网膜组织的影响。

虽然一些气溶胶研究表明,电子烟产生的颗粒物的生物活性明显低于 C 型香烟烟雾 [ 16 , 17 ],但越来越多的证据表明,这些超细颗粒仍然可以诱发炎症反应,并且电子的使用香烟会产生毒性并诱导炎症介质的释放 [ 18 , 19 , 20 ]。动物研究还表明,含尼古丁的电子烟蒸气暴露会增加小鼠的肺部炎症和氧化应激 [ 21 , 22 ]]。迄今为止,关于电子烟蒸气对视网膜或眼底健康影响的科学证据仍然有限,因此提出了电子烟蒸气与 C 烟烟雾相比是否同样危险的问题。

在此,我们通过吸烟小鼠模型的分子研究评估了 C 型香烟烟雾和电子烟蒸汽对视网膜的影响。此外,还确定了电子烟蒸气对 RPE 和脉络膜的影响,并分析了视网膜/RPE/脉络膜中炎症和血管生成介质的变化,以评估电子烟蒸气暴露与诱发小鼠的炎症血管生成作用,这可能与人类湿性 AMD 的发病有关。

材料和方法

本文中提供的数据是大型多学科实验装置的一部分,旨在描述烟雾和蒸汽暴露对身体不同组织(尤其是肺)的影响。实验中使用的小鼠是来自我们自己的菌落的 C57BL/6J 或直接从 Charles River Deutschland, Sulzfeld, Germany 购买。在实验期间,动物被圈养在 12:12 小时、明暗循环以及随意的食物和水供应下。实验组的概述显示在图1中

图。1
图1

实验组概述。a C-香烟暴露组包含中长期亚组和相应的对照小鼠。b电子烟暴露组包含短期、中期和长期亚组,其中使用不含尼古丁的电子烟和含尼古丁的电子烟,但长期亚组除外,其中只有尼古丁-使用了含电子烟。每组眼睛的数量列在每组下方的灰色框中

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实验动物和烟雾暴露

在 C 烟暴露组和电子烟短时间暴露亚组中采集视网膜组织。在电子烟中长期暴露亚组中,所有视网膜、RPE 和脉络膜均被采集。在每组中,视网膜被合并以进行本文中介绍的不同检测。在电子烟设置中,小鼠暴露于不含尼古丁的液体或含有 18 毫克/毫升尼古丁的液体的蒸气中。唯一的例外是长期暴露时间点,小鼠仅暴露于含有尼古丁的液体的蒸气中。保持在相同条件下且不接触香烟烟雾或蒸气的年龄匹配的小鼠用作相应的对照。

C-香烟烟雾暴露

雄性 C57BL/6J 小鼠(14±2 周大)被分成两个具有不同暴露时间的亚组(图1a)。通过烟雾发生器(伯克哈特,威德尔,德国)生成的全身暴露于3R4F香烟的主流烟(肯塔基烟草研究和开发中心,USA,含有每根香烟0.7毫克的尼古丁)如先前所述[做232425 ]。颗粒浓度调整为 200 mg/m 3,小鼠每天暴露 6 小时,每周 5 天,持续 3(中期)或 8(长期)个月 [ 26 ]。对照组小鼠保持在室内空气环境中,其他条件与相应实验组相似。

电子烟蒸气暴露

雄性 C57BL/6J 小鼠(14±2 周大)使用 inExpose 吸入暴露系统(SCIREQ,蒙特利尔,加拿大),每周 5 天,每天 6 小时,全身暴露于电子烟蒸气中。电子烟蒸汽由 Joyetech eVic-VTC 迷你电子烟 (Joyetech) 产生,并集成到 inExpose 吸入暴露系统 (SCIREQ Scientific Respiratory Equipment Inc.) 中。使用含有 55% 丙二醇、35% 甘油和 10% 水的市售电子烟基础液体(Avoria GmbH,Nuremberg,Germany)。电子烟液体每分钟蒸发 2 口(每口蒸发 2 秒),因此一天(6 小时)总共 720 口。电子烟的 vaping 设置中有三个不同的子组(图1b) 2 周、3 个月和 8 个月的不同暴露时间分别作为短期、中期和长期亚组。为了评估尼古丁对视网膜/RPE/脉络膜的影响,短期和中期亚组进一步分为使用不同种类电子烟液体(不含尼古丁和含 18 mg/ml尼古丁)不含调味剂。

视网膜、RPE 和脉络膜/巩膜剥离

安乐死后,将眼睛摘除并立即置于冰上的 1×PBS 缓冲液中。通过切割视神经小心地移除视网膜。将杯状半眼球(由RPE、脉络膜和巩膜组织组成)从边缘到视神经方向垂直切割成四个小皮瓣。将剩余组织压平,转移到1.5-mL离心管中其中含有冰浴冷却的 100 µL RIPA 蛋白裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂,完全浸入裂解缓冲液后,将离心管置于冰上孵育 1 h,轻敲离心管数次以帮助 RPE 层与脉络膜/巩膜分离。在孵化后期,观察到棕色团块(即 RPE 层)与脉络膜/巩膜分离,27 ]。所有样品立即储存在-80°C 直至进一步使用。每个亚组合并所有视网膜、RPE 和脉络膜,以获得足够的材料来进行所有检测(见下文)。

蛋白质提取和酶联免疫吸附测定

使用 AllPrep RNA/Protein Kit(80404,QIAGEN,Germany)分离蛋白质,并用于量化细胞因子 IL-1β 和 VEGF 的水平,通过小鼠 IL-1beta/IL-1F2 DuoSet 和小鼠 VEGF DuoSet ELISA 试剂盒进行分析( R&D Systems),以及使用小鼠色素上皮衍生因子 (PEDF) ELISA 试剂盒(KTE70449,Abbkine,中国)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)、ELISA 试剂盒 (MBS030771, My BioSource,美国)和小鼠 TNF-α DuoSet ELISA 试剂盒(R&D Systems)。所有测定均根据相关制造商的方案进行。一式两份测定所有样品。C烟和电子烟暴露组的中长期对照小鼠年龄相近,遗传背景相同,饲养条件相近,合并对照数据。

在检测极低蛋白质水平的情况下,即在测量 IL-1β 和 VEGF 时,我们通过进一步稀释最低标准样品来扩展标准曲线,并且能够根据 DIN 32645 计算出检测下限为 1.95 pg /ml在两种情况下都具有足够的准确度 (R 2 ≥ 0.8)。

表1 ELISA各蛋白检测范围
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数据统计

值表示为平均值±SD(标准偏差)。使用单向或双向方差分析(1 或 2 向方差分析)或多重 t 检验来确定统计显着性。所有统计数据均使用 GraphPad Prism 7(GraphPad Software Inc,SanDiego,CA,USA)进行,P < 0.05 定义为统计显着(表1)。

结果

C-香烟烟雾暴露对视网膜的中长期影响

在从中期C-香烟烟雾暴露子组的视网膜,PEDF(图的水平2 E)略有增加,和VEGF的比率PEDF(图2 F)下降约40%,比对照组小鼠,但吸烟者和对照小鼠的炎症相关细胞因子蛋白水平没有显着差异。在从长期C-香烟烟雾暴露子组的视网膜,IL-1β的水平(图2 A)显着高于对照小鼠(约2.4倍)显著较高,而VEGF的比率PEDF(图2 f) 略有下降。

图2
图2

来自 C 型香烟烟雾暴露(中、长期)亚组的小鼠视网膜中的蛋白质水平。提供的数据来自因子 IL-1β ( a )、iNOS ( b )、TNF-α ( c ) 和 VEGF ( d ),以及 PEDF ( e )。VEGF 与 PEDF 的比值反映了 RPE/视网膜界面处两个因子的平衡变化(f)反映了促血管生成的综合作用。数据表示为平均值±SD。* P < 0.05,** P < 0.01,*** P < 0.001,**** P < 0.0001。LLD检测下限

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电子烟蒸气(有或没有尼古丁)暴露对视网膜的短期、中期和长期影响

在短期E-香烟蒸汽暴露亚组中,iNOS的表达(图3中以游离尼古丁子组中的视网膜c)中被增加,而TNF-α的水平(图3 b)和的比VEGFPEDF(图3 f)显着降低。从含尼古丁的E-香烟子组结果表明降低的TNF-α(图的水平3 b)和VEGF的下调的比率PEDF(图3 F)在视网膜从蒸气暴露的小鼠与比较对照小鼠。

图 3
图3

来自电子烟蒸气暴露(短期、中期、长期)亚组的小鼠视网膜中的蛋白质水平。提供的数据来自因子 IL-1β ( a )、iNOS ( b )、TNF-α ( c ) 和 VEGF ( d ),以及 PEDF ( e )。VEGF 与 PEDF 的比值反映了 RPE/视网膜界面处两个因子的平衡变化(f)反映了促血管生成的综合作用。数据表示为平均值±SD。* P < 0.05,** P < 0.01,*** P < 0.001,**** P < 0.0001。LLD检测下限

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在中期电子烟蒸气暴露亚组中,无尼古丁电子烟亚组中 VEGFPEDF的比率(图3 f)显着增加。与此相反,从含尼古丁子组中的结果表明,IL-1β(图表达式3 a)和VEGF的比率PEDF(图3 F)显著降低。

有趣的是,长期含尼古丁的E-香烟蒸汽暴露降低TNF-α的表达(图3 b)和下调VEGF的比率PEDF以及(图3 F)。

电子烟蒸气(有或没有尼古丁)暴露对 RPE 和脉络膜的中长期影响

令人惊讶地,在RPE中,中期无尼古丁的E-香烟蒸气曝光后,IL-1β的蛋白水平(图4 a)中,iNOS的(图4 c)和VEGF(图4 d)分别为上调,并且 VEGFPEDF的比率(图4 f)也显着增加。同时,从含尼古丁子组中的结果表明,IL-1β(图的两个级别4 a)和TNF-α(图4 b)中显著增加。此外,VEGFPEDF的比例增加(图4f) 与不含尼古丁的亚组相比更明显。在长期暴露亚组中,促炎介质蛋白水平的变化与中期暴露亚组相似但不显着。然而,有对VEGF的比率没有显著变化PEDF(图4 F)。

图 4
图4

来自电子烟暴露(中、长期)亚组的小鼠RPE ( a - f ) 和脉络膜 ( g - l ) 中的蛋白质水平提供的数据来自因子 IL-1β ( a , g )、iNOS ( b , h )、TNF-α ( c , i )、VEGF ( d , j ) 和 PEDF ( e , k )。VEGF与PEDF的比值反映了RPE/视网膜界面处两个因子的平衡变化(f,l),反映了促血管生成的综合作用。所有数据均表示为平均值±SD。* P< 0.05,** P < 0.01,*** P < 0.001,**** P < 0.0001。LLD,检测下限

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在脉络膜,中期无尼古丁的E-香烟蒸气曝光后,IL-1β(图的水平4克),TNF-α(图4 h)和VEGF(图4 j)的所有增加显着地。从含烟碱的子组中的结果表明IL-1β的轻微增加(图4 G),和一个显著降低VEGF的比率PEDF(图4 1)。此外,含尼古丁-E-香烟蒸气的长期暴露导致较高水平的IL-1β(图4 G),iNOS的(图4 I),和VEGF的增加的比率PEDF(图4升)。

C-香烟烟雾与电子烟蒸汽(不含尼古丁或含尼古丁)对视网膜组织的影响比较

在中期暴露组中,抗血管生成介体PEDF(图中的表达5在暴露于C-香烟烟雾视网膜组织E)增加了53%,以及比VEGF的降低PEDF(图5 f) 39%。令人惊讶地,PEDF(图5 e)将烟碱游离电子烟亚组在相反的趋势改变,导致VEGF的增加的比率PEDF(图5的50%,而不是降低F)。在含尼古丁的电子烟亚组中,IL-1β(图5a的表达水平在暴露后下降了 56%,而 TNF-α(图5b) 增加了 38%。除此之外,血管生成相关因子的调节趋势与C-香烟亚组相似。

图 5
图5

比较炎症相关(a IL-1β、b TNF-α、c iNOS)和血管生成相关细胞因子(d VEGF、e PEDF、f VEGFPEDF 的比率的百分比变化比较了 C 型香烟烟雾和电子烟蒸汽亚组之间的蛋白质水平。CC:C 型香烟烟雾,EC-0 毫克 NT:电子烟(不含尼古丁)蒸气,EC-18 毫克 NT:电子烟(含尼古丁)蒸气,M:中期,L:长期

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在长期暴露亚组中,C-香烟暴露亚组的变化趋势与中期组相似。最显著变化是上调IL-1β(图5一)蛋白由143%,而在VEGF的比率的变化PEDF(图5 F)较小。在含尼古丁的E-香烟组,炎症相关的细胞因子IL-1β(图5 a)中,TNF-α(图5 b)中,和iNOS(图5 c)中都略微下调。此外,VEGF(图的表达水平5 d)和PEDF(图5 E)分别同时增加,给予VEGF的比值降低PEDF(图5f) 4.8%。

讨论

大多数关于吸烟与 AMD 相关性的报道研究主要集中在吸烟对 RPE 的影响,很少关注视网膜。在本研究中,吸烟对视网膜、RPE 和脉络膜组织的影响通过研究中长期暴露于 C 型香烟烟雾后不同细胞因子的蛋白质水平,以及短期、中期、和长期接触电子烟蒸气(有或没有尼古丁)。关于电子烟蒸气,进行了中长期暴露实验以模拟人类的吸电子烟习惯,并研究电子烟蒸气与炎症和血管生成增加的关联。还进行了短期暴露,以评估电子烟蒸气对视网膜的直接不利影响。

这两种AMD的发病机制并不相同。干性 AMD 被认为开始于 RPE 功能障碍,然后是光感受器和脉络膜毛细血管的功能障碍/丧失。在湿性 AMD 中,它可能始于单独或与 RPE 层一起出现脉络膜血管系统功能障碍/丧失,然后是脉络膜毛细血管中促炎介质的积累,随后 RPE 因缺氧而产生过多的血管生成物质,这将导致导致血管生成从脉络膜血管进入视网膜 (CNV) 和光感受器损失 [ 28 , 29]。在本研究中,中期接触电子烟蒸气后视网膜、RPE 和脉络膜的综合结果表明,含尼古丁和不含尼古丁的电子烟蒸气均可刺激促炎和血管生成介质的表达,在 RPE 和脉络膜组织中积累。这很可能是导致这些组织发生炎症反应并诱发 CNV 的原因。有趣的是,这样的结果与上述湿性AMD的发病机制是一致的,这表明即使没有尼古丁或调味剂,仅来自碱性溶剂(丙二醇、植物甘油)的电子烟蒸气仍然可以促进其发生和发展湿 AMD。此外,含尼古丁的电子烟蒸气对 RPE 产生的不良影响,比不含尼古丁的强。由于这两种电子烟蒸气之间的唯一区别是尼古丁成分,因此进一步证实了尼古丁成分会增强碱性溶剂对 RPE 和脉络膜的有害影响的观点。如图所示。如图4f所示,含尼古丁亚组中VEGFPEDF之比的相对变化比不含尼古丁亚组高约1.7倍。这一结果与 Pons 及其同事的实验研究一致,他们证实尼古丁可以通过与 RPE 中的烟碱乙酰胆碱受体结合来增加 VEGFPEDF的比率,这对于二手烟者湿性 AMD 的发展至关重要[ 30 ]。以往的研究表明,尼古丁是一种具有促血管生成作用的药物,可以刺激CNV的增殖[ 31 ],也有报道尼古丁对促血管生成和炎症介质表达的影响[ 32]。]。Bekki 及其同事的研究表明,加热碱性溶剂可以生成一些羰基化合物,如甲醛、乙醛、丙酮和丙烯醛 [ 33 ]。其他研究表明,丙烯醛也存在于香烟烟雾中,可能诱发巨噬细胞和上皮细胞的炎症反应 [ 34 , 35]]。所有这些报告的发现都可以使我们从含尼古丁的电子烟蒸气暴露实验中得出的结果合理化,即使来自仅包含碱性溶剂的电子烟液的蒸气也可以刺激 RPE 中促炎和血管生成介质的表达,以及脉络膜中的促炎介质。基于这些报道,我们推测溶剂蒸气中的丙烯醛或其他相关羰基化合物诱导了 RPE 细胞和脉络膜毛细血管内皮细胞或一些独特的炎症细胞中促炎介质的表达。然而,需要进一步的纵向研究来揭示不含尼古丁的电子烟蒸汽如何导致血管生成。

通过比较中长期电子烟蒸气暴露的数据,我们观察到主要受损的组织从 RPE 和脉络膜变为单独的脉络膜。此外,RPE 中 VEGF 和 PEDF 的水平显着降低,甚至低于相关对照小鼠。根据湿性AMD的病理进展,推测随着暴露时间的延长,RPE的损伤可能会更加严重,RPE层功能失调甚至凋亡/坏死,导致产生促蛋白的能力下降。炎症和血管生成因子。另一方面,由于脉络膜血管丢失的增加,脉络膜毛细血管缺氧变得更加严重[ 36]。],这会刺激脉络膜毛细血管内皮细胞产生更多的血管生成物质,如 VEGF,因此,抗血管生成介质 PEDF 的表达降低,促进 RPE/视网膜界面病变中 CNV 的产生,这是一个标志性的标志。人类湿性AMD的发展。

此外,我们的研究结果表明,短期接触电子烟蒸气(不含尼古丁和含尼古丁)后,视网膜组织中的抗血管生成途径被激活,并且在表达方面没有发生显着变化。促炎介质。这表明短期接触电子烟蒸气对视网膜组织的促炎作用有限。此外,通过总结中长期观察,假设含有和不含尼古丁的电子烟蒸气对视网膜的损伤有限,但对 RPE 和脉络膜的损伤更大。

迄今为止,吸烟对视网膜/RPE/脉络膜的确切机制仍不清楚。然而,一些评论总结了吸烟会增加氧化应激负担,从而诱导 RPE 和脉络膜的炎症反应,导致视网膜/RPE 的损伤。此外,损害脉络膜血流和减小灌注压可能会导致缺氧和促进血管生成,并最终导致AMD [发展373839 ]。另一项综述阐述了电子烟蒸气暴露不仅会破坏肺内稳态,还会通过气道增加炎症反应和氧化应激 [ 40]]。虽然没有关于电子烟蒸气在视网膜上的机制的专门研究,但基于呼吸系统研究,我们假设蒸气也会引起类似于 C 香烟烟雾的眼底炎症反应和氧化应激。

关于我们研究的局限性,应该考虑在该小鼠模型中进行全身暴露。眼表的前部组织(如角膜)以及眼睛周围的皮肤已暴露在烟雾或蒸汽中,这可能会对我们的结果产生影响。然而,由于生理障碍的存在,分子在眼睛中的前/后扩散不容易实现。因此,由于这种暴露也类似于人类烟雾/蒸气暴露,因此不应显着干扰此处提供的数据。第二个限制是在某些亚组(电子烟、长期接触)中分析的眼睛数量相对较少。这使得对相应数据的解释不太可靠。然而,这些关于少量动物的初步数据提供了对这些尚未得到充分研究的机制的初步看法,并为进一步增加动物数量的实验铺平了道路。第三个限制是 VEGF 和 IL-1ß 的值有时非常低,低于制造商公布的检测范围。为了在这些样品中也产生有价值的数据,我们扩展了 ELISA 的标准曲线并单独计算了检测下限。这样,与制造商提供的标准曲线内获得的值相比,我们获得的值必须更加谨慎地考虑。第三个限制是 VEGF 和 IL-1ß 的值有时非常低,低于制造商公布的检测范围。为了在这些样品中也产生有价值的数据,我们扩展了 ELISA 的标准曲线并单独计算了检测下限。这样,与制造商提供的标准曲线内获得的值相比,我们获得的值必须更加谨慎地考虑。第三个限制是 VEGF 和 IL-1ß 的值有时非常低,低于制造商公布的检测范围。为了在这些样品中也产生有价值的数据,我们扩展了 ELISA 的标准曲线并单独计算了检测下限。这样,与制造商提供的标准曲线内获得的值相比,我们获得的值必须更加谨慎地考虑。

总之,通过提供分子实验证据,我们的研究首次证明暴露于电子烟蒸气(有或没有尼古丁)会诱导视网膜炎症和血管生成效应的发生和进展。蒸气中的尼古丁成分可能会增强碱性保湿剂的有害作用。此外,随着暴露时间的延长,含尼古丁的电子烟蒸气进一步增加了产生类似于湿性AMD的病理效应的可能性。